Résumé
• Le 13 juillet 2018, la Food and Drug Administration (FDA) américaine a annoncé le rappel de comprimés de valsartan en raison du risque de présence d'impuretés de nitrosamines dans certains produits.
• Diverses méthodes ont été développées et publiées par la FDA, utilisant l'espace de tête ou l'injection directe, pour détecter la présence de N-nitrosodiméthylamine (NDMA), de N-nitrosodiéthylamine (NDEA), de N-diisopropylnitrosoamine (NDIPA), de N-éthyl-N-isopropylnitrosoamine (NEIPA) et de N-nitrosodibutylamine (NDBA) par GC-MS/MS.
• Le PAL RTC, très polyvalent, est capable de combiner l'espace de tête et l'injection directe sur un seul système.
• Le PAL RTC a été validé conformément aux exigences de la FDA, avec une linéarité de calibration par injection directe de 0,9995, un %RSD (n=6) de 1,77 % pour une solution standard à 40 ng/mL et un rapport signal/bruit de 35 à 5 ng/mL. Bien que la FDA ne spécifie pas d'exigence de récupération pour les médicaments en injection directe, la récupération de la NDMA à 0,04 ppm a été de 112 (±4) %.
La répétabilité de l'extraction d'une série de 7 produits pharmaceutiques a démontré que la précision de l'extraction liquide-liquide automatisée PAL peut atteindre 4,4 %.
• En mode espace de tête, le PAL RTC a été validé conforme aux exigences de la FDA, avec une linéarité d'étalonnage de 0,9979, une limite de détection (LOD) et une limite de quantification (LOQ) de 0,01 ppm et 0,05 ppm, respectivement. Lors de l'extraction en espace de tête, le NDMA ajouté aux produits pharmaceutiques a pu être récupéré à 106 (±8) %, ce qui est largement inférieur à l'exigence de la FDA (80 % à 120 %), avec une précision de 7,7 % sur n = 7 échantillons.
• Les deux techniques ont été appliquées à l'analyse de comprimés de paracétamol et de valsartan. Le NDMA n'a été détecté ni dans le valsartan, ni dans le paracétamol.
Introduction
Les nitrosamines peuvent se former en présence d'amines secondaires, tertiaires ou quaternaires et de nitrites en milieu acide. Par conséquent, si les conditions suivantes sont réunies, la formation de nitrosamines ne peut être exclue :
Utilisation d'acide nitreux lors d'une étape de synthèse en présence d'amines précurseurs.
• Utilisation de nitrites comme réactif lors d'une étape (malgré la purification), un entraînement de nitrites est possible.
• Contamination des matières premières, telles que le solvant ou les réactifs de départ.
• Les solvants, catalyseurs et réactifs récupérés peuvent être des sources de contamination.
• Il a été démontré que les nitrosamines sont génotoxiques chez plusieurs espèces animales. Certains composés nitrosaminiques sont classés comme cancérogènes probables ou possibles pour l'homme par le Centre international de recherche sur le cancer (CIRC).
• On sait depuis des années que les médicaments peuvent être contaminés par des nitrosamines. Néanmoins, les mesures de contrôle des taux de nitrosamines dans les médicaments n'ont été introduites que récemment (Réf. 1).
• Depuis 2018, plusieurs lots de médicaments tels que les antagonistes des récepteurs de l'angiotensine II (ARA II), la ranitidine, la nizatidine et la metformine ont été rappelés en raison de la présence de taux inacceptables de nitrosamines.
• La FDA et l'EMA ont émis des recommandations pour contrôler les impuretés de nitrosamines dans les API de synthèse chimique, les médicaments contenant des API de synthèse chimique et les médicaments à risque (Réf. 2-4)
Configuration du système
Outils et modules utilisés pour extraction liquide liquide :
• Park Station avec outil liquide D757 et outil liquide D858 Liquid Tool (1)
• Tray Holder avecRack VT54 and VT15 (2)
• Centrifuge (3)
• Fast Wash Module (4)
• Solvent Module (5)
• Vortex Mixer (7)
Outils et modules utilisés pour extraction en espace de tête :
- Park Station avec outil espace de tête 2500μL (1)
• Tray Holder with Rack VT15 (2)
• Agitator (6)
Réactifs
Flux de travail pour l’extraction en espace de tête
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Flux de travail pour l'extraction liquide liquide
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1. Chauffer l'agitateur
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1. Vérifier le système
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2. Changer pour l'outil d'espace de tête
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2. Passer à l'outil de solvant
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3. Vérifier que l'agitateur atteigne 120 °C
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3. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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4. Transférer le flacon dans l'agitateur
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4. Transférer le solvant dans le flacon d'échantillon
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5. Incuber le flacon pendant 15 minutes
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5. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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6. Purger l'outil d'espace de tête
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6. Passer à l'outil ISTD
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7. Mettre le flacon sous pression
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7. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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8. Aspirer 1 mL de gaz de l'espace de tête
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8. Transférer l'étalon interne dans le flacon d'échantillon
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9. Injecter dans le GC
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9. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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10. Démarrer l'analyse
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10. Vortexer le flacon
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11. Remettre le flacon sur le support d'échantillons
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11. Centrifuger le flacon
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12. Attendre que le GC soit prêt
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12. Passer à l'outil principal
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13. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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14. Transférer l'extrait dans un nouveau flacon GC
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15. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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16. Attendre que le GC soit prêt
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17. Passer à l'outil d'injection
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18. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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19. Aspirer l'échantillon
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20. Injecter dans le GC
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21. Démarrer l'analyse GC
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22. Nettoyer l'outil avec un solvant aqueux et/ou organique
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Paramètres de l’extraction liquide liquide
Paramètres de l’extraction en espace de tête
Paramètres GC-MS/MS
Après extraction de la nitrosamine par extraction liquide-liquide ou par espace de tête, les échantillons ont été injectés et analysés par le GCMS avec la configuration suivante et la même méthode analytique a été appliquée, à l'exception du volume d'injection.
Résultats
Extraction liquide liquide automatisée
Avant l'analyse de médicaments, les systèmes PAL RTC et GC-MS/MS ont été validés. Conformément aux exigences de la FDA, avec injection et extraction de liquide standard avec le médicament (Panadol), réf.3.
Extraction automatisée de l'espace de tête
Avant l'analyse de médicaments réels, les systèmes PAL et GC-MS/MS ont été validés conformément aux exigences de la FDA avec injection de l'espace de tête à partir d'étalons et du médicament (Panadol), réf. 3.
Limites de quantification
Extraction liquide-liquide automatisée
La limite de quantification a été déterminée par ajout de la concentration requise (0,013 ppm) au produit pharmaceutique. Conformément aux exigences de la FDA, le rapport signal/bruit de la limite de quantification doit être supérieur à 10.
Produit pharmaceutique enrichi au niveau Produit pharmaceutique non enrichi
de la limite de quantification : S/N : 12
Extraction automatisée en espace de tête
La limite de quantification a été déterminée par ajout de la concentration requise (0,05 ppm) au produit pharmaceutique. Conformément aux exigences de la FDA, le rapport signal/bruit de la limite de quantification (LQ) doit être supérieur à 10.
Produit pharmaceutique enrichi au niveau Produit médicamenteux non enrichi
de la limite de quantification S/N : 13
N-Nitrosodiméthylamine (NDMA)
Extraction liquide-liquide automatisée
• Des solutions étalons de NDMA, de 2,5 ng/mL à 100 ng/mL, ont été préparées par ajout de la quantité requise de NDMA standard dans du méthanol.
• Injection de 2 µL de ces solutions étalons diluées dans le GC-MS/MS.
• Pour chaque solution étalon, les données ont été déterminées en triplicata avec une linéarité de 0,9995.
Extraction automatisée de l'espace de tête
• Des solutions de NDMA de concentrations comprises entre 0,05 µg/mL et 20 µg/mL ont été préparées manuellement par ajout de la quantité requise dans du DMSO pour obtenir un volume final de 5 mL.
• Injection de 1000 µL de la phase gazeuse chauffée dans le GC-MS/MS.
• Trois séries d'étalons de calibration ont été préparées et leur linéarité a été déterminée à 0,9986.
Extraction de NDMA à partir de Panadol enrichi
Extraction liquide-liquide automatisée
• Peser manuellement 500 mg de médicament (Panadol) dans un flacon à espace de tête de 10 mL et ajouter une solution standard de NDMA pour obtenir une concentration finale de 0,04 ppm.
• Sept échantillons de médicament en réplica ont été préparés et extraits selon le protocole décrit plus haut. Le coefficient de variation relatif (%RSD) est de 4,4 % et le taux de récupération de 112 (±4) %.
Extraction automatisée de l'espace de tête
• Peser manuellement 500 mg de médicament (Panadol) dans un espace de tête de 20 mL Dans un flacon, ajouter une solution standard de NDMA et compléter avec du DMSO pour obtenir une concentration finale de 0,05 ppm.
• Sept échantillons de drogue en réplique ont été préparés et extraits selon le protocole décrit plus haut. Le coefficient de variation relatif (%RSD) est de 7,6 % et le taux de récupération de 106 (±8) %.
Extraction de NDMA à partir de valsartan
Extraction liquide-liquide automatisée
• Les comprimés de valsartan ont été broyés et pesés dans des flacons à espace de tête de 10 mL pour subir l'extraction liquide-liquide automatisée, comme décrit à la page 3.
Extraction automatisée de l'espace de tête
• Les comprimés de valsartan ont été broyés et pesés dans des flacons à espace de tête de 20 mL. 5 mL de DMSO ont été ajoutés dans le flacon pour subir l'extraction automatisée de l'espace de tête, comme décrit à la page 3.
Conclusion
Une méthode d'extraction des nitrosamines entièrement automatisée, conforme aux spécifications de la FDA (réf. 3) pour l'injection directe et l'espace de tête peut être réalisée sur le même PAL RTC.
Le PAL RTC a été validé conformément aux exigences de la FDA.
Références
1. Review: Nitrosamine contamination in pharmaceuticals: threat, impact, and control; DOI:https://doi.org/10.1016/j.xphs...
2. U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Feb 2021, Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs – Guidance for Industry
3. U.S. Food & Drug Administration, 04/19/2019 – Combined Direct Injection N-Nitrosodimethylamine (NDMA), N-Nitrosodiethylamine (NDEA), N-Nitrosoethylisopropylamine (NEIPA), N Nitrosodiisopropylamine (NDIPA), and N-Nitrosodiebutylamine (NDBA) Impurity Assay by GC-MS/MS
4. EDQM (Council of EU): https://www.edqm.eu/en/edqms-r... https://www.bfarm.de/SharedDoc...;v=4
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Date d'impression : janvier 2022
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